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B6-Prkag1tm1小鼠,动物试验

原创发布者：北检院发布时间：2023-03-01 点击数：

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基本信息

品系名称：B6-Prkag1^tm1小鼠

英文名称：B6-Prkag1^tm1 mouse

疾病名称：代谢类疾病

相关基因：PRKAG1

背景品系：C57BL/6J

遗传类型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代数：NA

研究用途：用于脂类合成、代谢等及信号转导方面的研究。

饲养环境：屏障或隔离环境

培育单位：北京华阜康生物科技股份有限公司、中国医学科学院医学实验动物研究所

保种单位：中国医学科学院医学实验动物研究所

资源鉴定：否

鉴定日期：暂无介绍

特征描述

基因概述：

该基因编码的蛋白是AMP激活蛋白激酶(AMPK)的调节亚基)。 AMPK是由α催化亚基、非催化β和γ亚基组成的异三聚体。 AMPK是一种重要的能量传感酶，监测细胞能量状态。在细胞代谢应激反应中，AMPK被激活，从而磷酸化和失活乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和β-羟基β-甲基戊二酰CoA还原酶(HMGCR)，这是参与调节脂肪酸和胆固醇新生物合成的关键酶。该亚基是AMPK的γ调控亚基之一。另外，还观察到编码不同异构体的剪接转录体变体【1】。

蛋白功能：

AMP激活蛋白激酶(AMPK)的AMP/ATP结合亚基，一种能量传感器蛋白激酶，在调节细胞能量代谢中起着关键作用。为了响应细胞内ATP水平的降低，AMPK激活了产生能量的途径，并抑制了消耗能量的过程：抑制蛋白质、碳水化合物和脂质的生物合成以及细胞的生长和增殖。 AMPK的作用是通过代谢酶的直接磷酸化，以及通过转录调节因子的磷酸化而产生的长期效应。通过重塑肌动蛋白细胞骨架，也起到调节细胞极性的作用；可能是通过间接激活肌球蛋白。伽马非催化亚基介导与AMP、ADP和ATP的结合，从而激活或抑制AMPK：AMP结合通过诱导磷酸化和防止催化亚基的去磷酸化而导致α催化亚基(PRKAA1或PRKAA2)的变构激活。 ADP还能刺激磷酸化，而不刺激已经磷酸化的催化亚基。 ATP促进催化亚基去磷酸化，使AMPK酶不活跃。

生物过程：参与脂肪酸生物合成，脂肪酸代谢，脂类生物合成，脂类代谢。

动物简介

蛋白激酶AMP激活的非催化亚基γ1是一种能量传感器蛋白激酶，在调节系报能量代谢中起着关键作用。

营养成分

饲料营养成分：水分≤10%；粗蛋白≥20%；粗脂肪≥4%；粗纤维≤5%；粗灰分≤8%；钙1.0-1.8%；磷0.6-1.2%。

生物学特性

生长曲线：无寿命：1-2年解剖学：无繁殖学：近交繁殖自发异常：无生理生化指标：无

遗传信息

根据目标基因Prkag1的基因组结构，参考文献中的敲除方案，选择exon3和exon5上各设计两对gRNA，删除中间约450bp DNA片段，Prkag1的转录产物都发生移码突变，达到蛋白功能失活的目的。同时，删除小片段DNA利于小鼠扩繁生产中通过PCR反应鉴定后代基因型。因此，CRISPR设计靶点将设计在转录产物Prkag1的exon3和exon5上（下图中的红色箭头所指位置）；

有报道指出PRKAG1、PRKAG2和PRKAG3编码AMP激活蛋白激酶γ链的三种亚型。对肉品质的一个主要影响和对PRKAG3基因RN−突变的背部脂肪厚度的中等影响已经被报道。我们现在已经通过分析辐射杂种(IMpRH)将PRKAG1和PRKAG2映射到SSC5和SSC18的预期位置)。 PRKAG2已经被定位在一个没有数量性状位点(QTL)的区域。 PRKAG1已被映射到一个包含影响脂肪性状QTL的区域附近(但可能在外部)。我们确定了PRKAG1的完整编码序列。在比较一只梅山大白公猪编码序列时，未发现错义突变。然而，还需要进一步的工作来确定PRKAG1中的多态性是否可能对脂肪性状上观察到的部分变异性负责【2】哺乳动物5’-AMP激活蛋白激酶(AMP K)是一种由α、β和γ亚基组成的异三聚体蛋白。 α亚基是催化亚基。非催化亚单位AMPK-β和AMPK-γ形式，连同催化AMPK-α，哺乳动物中的活性激酶复合物及其在酵母中的同系物。 AMPK-γ-1的基因最近被指定为PRKAG1。我们从睾丸(1623nt)中分离出小鼠Prkag1cDNA，编码330AA，并显示其普遍表达为1.8kb的转录本。通过对小鼠、大鼠和人PRKAG1cDNA和蛋白质序列的比较，发现该基因在这些物种中高度保守，在蛋白质水平上同源性为96。 southernblot印迹分析表明，小鼠基因组中存在多个PRKAG基因。 prkag1包含12个带有短内含子的外显子。分析50只种间回交小鼠将小鼠基因定位到15号染色体远端区域【3】。有报道指出编码AMPKγ亚单位的PRKAG1基因在结直肠癌中的发生移码突变【4】。