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核酸检测样品提取检测标准

原创发布者:北检院    发布时间:2025-04-25     点击数:7

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核酸检测样品提取与检测标准解析

核酸检测作为病原体诊断的核心技术之一,其结果的准确性高度依赖于样品提取与检测流程的标准化操作。本文从检测样品、检测项目、检测方法及仪器设备等维度,系统介绍核酸检测的关键技术规范。

一、检测样品类型与要求

核酸检测的主要样品类型包括咽拭子鼻咽拭子痰液血液组织样本等。样品采集后需遵循以下要求:

  1. 咽/鼻咽拭子应使用专用病毒采样管保存,内含2-3 mL病毒保存液;
  2. 血液样品需使用EDTA抗凝管,避免溶血;
  3. 所有样品在运输中需保持2-8°C环境,超过48小时需置于-70°C以下冷冻;
  4. 样品标识需,避免交叉污染。

二、检测项目与指标

核酸检测的核心项目包括:

  • 核酸提取:评估RNA/DNA的纯度(OD260/OD280比值1.8-2.0)、浓度(≥20 ng/μL)及完整性;
  • 靶基因检测:例如新冠病毒检测需覆盖ORF1ab基因和N基因双靶标;
  • 内参基因检测:如人类RNase P基因,用于验证采样有效性;
  • 质控标准:阳性对照、阴性对照及环境对照需符合实验预期。

三、检测方法与流程

1. 核酸提取方法 采用磁珠法或离心柱法进行核酸纯化。具体步骤包括: 样品裂解(使用含蛋白酶K的裂解液)、结合(磁珠吸附核酸)、洗涤(乙醇去除杂质)及洗脱(低盐缓冲液释放核酸)。全程需在生物安全柜内操作,防止气溶胶污染。

2. PCR扩增检测

  • 试剂配制:按比例混合PCR预混液、引物探针及模板DNA;
  • 扩增程序:设置预变性(95°C, 5分钟)、40个循环的变性-退火-延伸(95°C 10秒→60°C 30秒);
  • 结果判读:Ct值≤37判定为阳性,37<Ct值<40需复测,阴性对照需无扩增曲线。

四、检测仪器与设备

  1. 核酸提取仪:如MagNA Pure 96全自动核酸提取系统,支持高通量样本处理;
  2. 实时荧光定量PCR仪:ABI 7500或Bio-Rad CFX96,具备多通道荧光检测功能;
  3. 高速离心机:用于样品预处理,转速需达12,000 rpm以上;
  4. 生物安全柜:符合二级生物安全标准,保障操作人员防护;
  5. 微量分光光度计:用于核酸浓度与纯度检测(如NanoDrop系列)。

结语

核酸检测的标准化操作是保障结果可靠性的基石。从样品采集到数据解读,需严格遵循质量控制体系,同时结合实验室条件优化流程,方能为临床诊断与疫情防控提供精准支持。


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实验仪器

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测试流程

核酸检测样品提取检测标准流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考,因为每个样品和项目都有所不同,所以最终以工程师告知的为准。

3.关于(样品量)的需求,最好是先咨询我们的工程师确定,避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右,部分样品有所差异

5.如果对于(核酸检测样品提取检测标准)还有什么疑问,可以咨询我们的工程师为您一一解答。

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