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核酸检测pcr流程检测标准

原创发布者:北检院    发布时间:2025-04-23     点击数:

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核酸检测(PCR)流程及标准解析

一、检测样品 核酸检测的主要样品类型包括咽拭子、鼻拭子、血液、痰液及环境样本(如物体表面拭子)。其中,呼吸道样本(咽拭子、鼻拭子)是新冠病毒检测的核心样品类型。所有样本需在采集后密封保存于专用病毒保存液中,并在2~8℃条件下运输,确保4小时内送达实验室。

二、检测项目 核酸检测的核心目标是检测样本中是否存在特定病原体的核酸片段。以新冠病毒为例,检测项目通常为病毒RNA中高度保守的ORF1ab基因、N基因或E基因片段。此外,部分检测会同步分析病毒载量,为临床诊断或流行病学研究提供数据支持。

三、检测方法 核酸检测采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR),具体流程分为以下步骤:

  1. 样本预处理:在生物安全二级实验室(BSL-2)内,将样本与裂解液混合,灭活病毒并释放核酸。
  2. 核酸提取:使用磁珠法或离心柱法分离纯化RNA,去除蛋白质及其他干扰物质。
  3. 反转录与扩增:将RNA反转录为cDNA,随后通过PCR扩增目标基因片段,荧光探针实时监测扩增信号。
  4. 结果判读:根据扩增曲线和Ct值(循环阈值)判断样本是否阳性。Ct值≤37定义为阳性,>40为阴性,介于两者需复测。

四、检测仪器 核酸检测需依赖专业仪器完成全流程操作,主要包括以下设备:

  1. 核酸提取仪:如天隆NP968、雅睿生物EXM300,用于自动化提取核酸。
  2. 实时荧光PCR仪:包括罗氏LightCycler 480、伯乐CFX96等,支持多通道荧光检测。
  3. 生物安全柜:保障操作人员安全,防止气溶胶污染。
  4. 离心机与微量移液器:用于样本预处理及试剂分装。

五、质量控制要求 检测全程需设置阴性对照(不含模板的空白试剂)和阳性对照(含目标核酸的标准品),以排除假阴性与假阳性风险。实验室需定期参加室间质评,确保检测结果准确可靠。

结语 核酸检测作为病原体诊断的“金标准”,其标准化流程对疾病防控至关重要。通过严格规范样品采集、试剂选择及仪器操作,可显著提升检测结果的可靠性,为公共卫生决策提供科学依据。


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实验仪器

实验室仪器 实验室仪器 实验室仪器 实验室仪器

测试流程

核酸检测pcr流程检测标准流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考,因为每个样品和项目都有所不同,所以最终以工程师告知的为准。

3.关于(样品量)的需求,最好是先咨询我们的工程师确定,避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右,部分样品有所差异

5.如果对于(核酸检测pcr流程检测标准)还有什么疑问,可以咨询我们的工程师为您一一解答。

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