核酸检测盒的检测标准

原创发布者：北检院发布时间：2025-04-21 点击数：

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。

<!DOCTYPE html> <html lang="zh-CN"> <head> <meta charset="UTF-8"> <title>核酸检测盒标准化检测流程说明</title> <meta name="description" content="新型冠状病毒核酸检测盒的标准化检测流程技术文档"> </head> <body> <h1>核酸检测盒标准化检测技术规范</h1>

<h2>检测样品要求</h2> 本检测盒适用于人类上呼吸道样本检测，包括鼻咽拭子、口咽拭子、痰液及唾液样本。样本采集后应立即置于病毒保存液中，2-8℃环境下保存不超过72小时，-20℃冷冻可保存30天。样本运输需符合UN3373生物安全标准。 <h2>核心检测项目</h2> 检测靶标为新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因双靶标区域。设置内源性内标（人类看家基因）监控采样有效性，包含阴性对照、阳性对照和空白对照三重质控体系，灵敏度可达200 copies/mL。 <h2>检测方法流程</h2> <h3>核酸提取阶段</h3> 采用磁珠法核酸提取技术，使用蛋白酶K对样本进行裂解处理，通过结合-洗涤-洗脱三步纯化流程获得病毒RNA。整个操作在生物安全柜内完成，符合二级生物安全实验室规范。 <h3>扩增检测系统</h3> 使用实时荧光定量RT-PCR技术，反应体系包含TaqMan探针和特异性引物。设置45个扩增循环，通过FAM和VIC双通道分别检测ORF1ab和N基因，HEX通道监测内标。扩增程序包含50℃ 15分钟逆转录，95℃ 2分钟预变性，以及45个循环的95℃ 15秒、60℃ 30秒反应。 <h2>检测仪器配置</h2> 标配设备包含：<br> • ABI 7500型实时荧光定量PCR仪<br> • 博日科技NPA-32全自动核酸提取仪<br> • 海尔医用冷藏冷冻箱DW-86L626<br> • 艾本德微型离心机5424<br> 所有设备均需通过年度计量校准，实验环境保持18-25℃恒温。 <h2>结果判读标准</h2> 阳性判定需同时满足：ORF1ab和N基因Ct值均≤38，且扩增曲线呈现典型"S"型；单靶标阳性需重复检测确认。阴性样本应显示内标基因正常扩增，空白对照无荧光信号。灰区样本（Ct值38-40）需重新检测确认。
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