流式检测细胞焦亡检测

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流式细胞术检测细胞焦亡的技术方案与应用

细胞焦亡（Pyroptosis）是一种由炎性小体激活的细胞程序性死亡方式，与感染、免疫反应及多种疾病密切相关。近年来，流式细胞术因其高通量、高灵敏度的特点，成为检测细胞焦亡的重要技术手段。本文将详细介绍基于流式细胞术的细胞焦亡检测方案，涵盖检测样品、检测项目、方法流程及仪器选择。

一、检测样品

1. 细胞类型：适用于贴壁细胞（如THP-1、RAW264.7巨噬细胞）、悬浮细胞（如Jurkat细胞）或原代细胞（如外周血单核细胞）。
2. 样品处理：需根据实验设计对细胞进行刺激（如LPS联合ATP处理、病原体感染或药物干预），诱导焦亡发生。

二、检测项目

1. 细胞膜完整性变化：焦亡伴随细胞膜孔道形成，可通过膜联蛋白V（Annexin V）与碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）双染色区分早期与晚期焦亡细胞。
2. 炎性小体激活标志物：Caspase-1活化是焦亡关键通路，使用荧光标记的Caspase-1抑制剂（如FAM-YVAD-FMK）进行检测。
3. 细胞内容物释放：检测胞内炎性因子（如IL-1β、IL-18）的释放水平。

三、检测方法

1. 细胞染色流程：

   • 收集细胞后，用预冷PBS洗涤两次。
   • 加入Annexin V-FITC和PI避光孵育15分钟（室温）。
   • 对于Caspase-1检测，加入FAM-YVAD-FMK探针孵育30分钟（37℃）。
   • 流式缓冲液重悬细胞后上机检测。

2. 数据分析：

   • Annexin V+/PI-：早期焦亡细胞。
   • Annexin V+/PI+：晚期焦亡或坏死细胞。
   • Caspase-1阳性细胞比例反映炎性小体激活程度。

四、检测仪器

1. 流式细胞仪型号：

   • BD FACSCanto II：支持多色荧光检测，适用于Annexin V/PI双参数分析。
   • Beckman CytoFLEX：高灵敏度配置，适合检测低丰度Caspase-1信号。
   • Attune NxT：适用于高通量样本，可快速完成大批量数据分析。

2. 参数设置：

   • 激发波长：FITC（488 nm）、PI（561 nm）。
   • 数据采集软件：FlowJo或BD FACSDiva进行图形化分析。

五、应用场景

1. 药物开发：评估化合物对炎性通路的影响。
2. 疾病机制研究：解析感染性疾病或自身免疫疾病中焦亡的作用。
3. 毒理学研究：检测环境毒素或纳米材料诱导的细胞损伤。

结语

流式细胞术为细胞焦亡研究提供了高效、精准的技术平台。通过合理设计实验方案、选择特异性探针及优化仪器参数，可全面解析焦亡的动态过程及分子机制，为疾病治疗和药物研发提供重要依据。

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（流式检测细胞焦亡检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。