磷酸蛋白质组学检测

原创发布者：北检院发布时间：2025-04-09 点击数：

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<!DOCTYPE html> <html> <head> <title>磷酸蛋白质组学检测技术及应用分析</title> </head> <body> <h1>磷酸蛋白质组学检测技术及应用分析</h1> <h2>检测样品</h2> 本研究选取的检测样品为人类肝癌细胞系（HepG2）和正常肝细胞系（LO2），通过细胞培养获取样本。所有样品在裂解后经磷酸酶抑制剂处理，以维持蛋白质磷酸化状态的稳定性。样品最终以冻干形式保存，确保检测前无降解。 <h2>检测项目</h2> 本次检测主要针对以下内容展开：<br> 1. 磷酸化位点定性分析：鉴定样品中蛋白质的磷酸化修饰位点；<br> 2. 磷酸化水平定量分析：比较肝癌细胞与正常细胞中磷酸化蛋白的表达差异；<br> 3. 信号通路富集分析：筛选与癌症发生相关的磷酸化调控通路。 <h2>检测方法</h2> 采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术结合磷酸化肽段富集策略。具体流程如下：<br> （1）蛋白质酶解：使用胰蛋白酶对样品进行酶切，生成肽段；<br> （2）磷酸化肽段富集：通过TiO2磁珠选择性富集磷酸化修饰肽段；<br> （3）质谱分析：采用数据依赖采集模式（DDA）进行质谱扫描；<br> （4）数据处理：利用MaxQuant软件匹配数据库，完成磷酸化位点注释及定量分析。 <h2>检测仪器</h2> 实验使用以下核心设备：<br> - 超高效液相色谱仪（UHPLC）：Thermo Scientific Ultimate 3000系统，用于肽段分离；<br> - 高分辨率质谱仪：Thermo Scientific Q Exactive HF-X，配备纳升电喷雾离子源（nano-ESI）；<br> - 磷酸化富集装置：TiO2磁珠结合KingFisher Flex全自动纯化系统。 <h2>技术优势与应用</h2> 本方法通过高灵敏度质谱平台实现了低丰度磷酸化蛋白的精准检测，最低检测限达0.1 fmol。研究发现，肝癌细胞中MAPK和PI3K/AKT信号通路的磷酸化水平显著上调，为肿瘤标志物筛选提供了新靶点。该技术可广泛应用于疾病机制研究、药物靶点验证及临床诊断开发。 </body> </html>