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稳转细胞检测技术流程与应用

检测样品

稳转细胞检测的样品主要为经过基因工程改造的稳定转染细胞系，例如HEK293、CHO、HeLa等常见哺乳动物细胞系。样品需满足以下条件：

1. 细胞状态良好，活率≥90%；
2. 转染基因稳定整合至基因组并通过筛选（如抗生素筛选）；
3. 传代次数控制在20代以内，避免基因沉默或表达不稳定。

检测项目

稳转细胞检测的核心项目包括：

• 基因表达水平：检测外源基因的转录活性；
• 蛋白表达水平：定量或定性分析目标蛋白的表达量与功能；
• 细胞活力与增殖能力：评估稳转对细胞生长的影响；
• 抗生素抗性验证：确认筛选标记基因的有效性；
• 长期稳定性：分析目标基因在连续传代中的表达一致性。

检测方法

1. 基因表达水平检测

采用**实时荧光定量PCR（qPCR）**技术，通过特异性引物扩增目标基因，以内参基因（如GAPDH）为对照，计算相对表达量。

2. 蛋白表达水平检测

• Western Blot：通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜后使用特异性抗体检测目标蛋白；
• 流式细胞术：针对表面蛋白或荧光标记蛋白，定量分析表达阳性细胞比例。

3. 细胞活力与增殖检测

• CCK-8法：通过检测细胞代谢活性间接反映增殖能力；
• 细胞计数与形态观察：结合台盼蓝染色评估活细胞比例。

4. 长期稳定性检测

连续传代培养后，定期取样检测目标基因或蛋白的表达水平，绘制稳定性趋势图。

检测仪器

1. 实时荧光定量PCR仪（如Bio-Rad CFX96）：用于基因表达定量分析；
2. 酶标仪（如Thermo Scientific Multiskan GO）：读取CCK-8、荧光素酶报告基因等吸光度或荧光信号；
3. 流式细胞仪（如BD FACSCelesta）：高通量分析蛋白表达及细胞分选；
4. 蛋白电泳系统（如Bio-Rad Mini-PROTEAN）：完成Western Blot的凝胶制备与电泳；
5. 细胞培养箱（如Thermo Scientific Heracell 150i）：提供恒温恒湿的细胞培养环境。

总结

稳转细胞检测是基因功能研究、药物筛选及生物制品开发的关键技术。通过标准化的检测流程与先进仪器，可确保实验数据的准确性和可重复性，为后续研究提供可靠依据。

作者：生物检测中心 | 发布时间：2023年10月

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（稳转细胞检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。