新冠检测qpcr检测标准

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新冠病毒核酸检测（qPCR）标准流程解析

引言 新冠病毒核酸检测（qPCR）是目前诊断COVID-19感染的核心技术，具有灵敏度高、特异性强的特点。本文将基于国家卫健委发布的《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南》，详细介绍qPCR检测的标准化流程及相关技术要求。

一、检测样品 检测样品主要来源于人体上呼吸道或下呼吸道分泌物，常见类型包括：

• 咽拭子：通过拭子采集咽后壁及双侧咽扁桃体处分泌物。
• 鼻拭子：深入鼻腔内侧壁（鼻腭处）轻柔旋转采集样本。
• 痰液：适用于有咳痰症状的患者。
• 支气管肺泡灌洗液（BALF）：针对重症患者或需明确下呼吸道感染的情况。

所有样本需在生物安全二级（BSL-2）实验室中处理，采集后应尽快冷藏（2~8℃）或冷冻（-70℃以下）保存。

二、检测项目 检测靶标为SARS-CoV-2病毒的特异性基因片段：

1. 开放阅读框1ab（ORF1ab）：病毒复制相关的关键基因。
2. 核衣壳蛋白基因（N基因）：病毒结构蛋白编码基因。 部分试剂盒同时包含内参基因（如人RNase P），用于监控样本采集及提取质量。

三、检测方法 实时荧光定量PCR（qPCR）

1. RNA提取

   • 使用磁珠法或柱膜法提取病毒RNA，需在生物安全柜内操作。
   • 提取试剂需含核酸保护剂，避免RNA降解。

2. 逆转录与扩增

   • 将RNA逆转录为cDNA，随后进行荧光定量PCR扩增。
   • 反应体系包含特异性引物、探针、dNTPs及Taq酶。

3. 结果判读

   • 阳性：ORF1ab和N基因Ct值均≤40，且扩增曲线呈典型S型。
   • 阴性：靶标基因无扩增，内参基因Ct值正常。
   • 灰区：单一靶标Ct值37~40，需复测确认。

四、检测仪器

1. 核酸提取仪

   • 型号示例：Bioer GenePure Pro、Qiagen QIAcube。
   • 功能：自动化完成样本裂解、结合、洗涤及洗脱步骤。

2. 实时荧光定量PCR仪

   • 型号示例：ABI 7500、Roche LightCycler 480。
   • 参数：支持多通道荧光检测（FAM、VIC/HEX等）。

3. 辅助设备

   • 生物安全柜（A2型）：保障操作人员安全。
   • 高速离心机：用于样本预处理。
   • 超低温冰箱：长期保存样本及试剂。

结语 qPCR检测需严格遵循标准化操作规范，同时配合阴性对照、阳性对照及环境监控，以确保结果可靠性。随着技术迭代，数字PCR（dPCR）等新方法也逐渐应用于临床研究，为精准诊断提供支持。

（本文内容参考国家卫健委2023年最新技术指南，数据更新至2023年10月。）

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实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（新冠检测qpcr检测标准）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。