细胞热转变检测

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细胞热转变检测技术及其应用

细胞热转变检测（Cellular Thermal Shift Assay, CETSA）是一种基于蛋白质热稳定性变化的功能性分析技术，广泛应用于药物开发、靶点验证及疾病机制研究等领域。该技术通过监测温度变化对细胞内蛋白质构象的影响，揭示药物与靶蛋白的结合情况。以下为检测流程的核心内容。

一、检测样品

细胞热转变检测的样品类型主要包括：

1. 体外培养细胞：如肿瘤细胞系（Hela、A549）、干细胞、原代细胞等。
2. 组织样本：通过机械破碎或酶解法提取的动物或人体组织细胞。
3. 重组蛋白溶液：纯化后的特定蛋白样品，用于对照实验。

二、检测项目

检测涵盖以下关键指标：

1. 细胞热稳定性分析：评估目标蛋白在不同温度下的构象变化。
2. 药物-靶蛋白结合验证：检测药物处理后蛋白热稳定性的改变，确认结合活性。
3. 变性温度（Tm值）测定：确定目标蛋白发生不可逆变性的临界温度。
4. 热诱导蛋白聚集或降解分析：研究温度对蛋白稳定性的长期影响。

三、检测方法

1. 样品预处理：细胞或组织经裂解缓冲液处理后，分装至多孔板中，设置温度梯度（如37°C至70°C）。
2. 热应激处理：将样品置于精确控温设备中孵育，诱导蛋白质变性。
3. 离心分离：去除热变性沉淀的蛋白，保留可溶性蛋白。
4. 蛋白定量：采用Western Blot、ELISA或质谱技术分析目标蛋白含量。
5. 数据分析：通过软件计算Tm值，绘制热稳定性曲线，评估药物结合效应。

四、检测仪器

1. 差示扫描量热仪（DSC）：用于高精度测定蛋白变性温度。
2. 实时荧光定量PCR仪：部分实验通过荧光染料（如SYPRO Orange）监测蛋白变性过程。
3. 多功能酶标仪：配合化学发光或荧光检测试剂完成高通量蛋白定量。
4. 离心机与恒温孵育箱：实现样品快速分离及精准温控。

五、技术优势

细胞热转变检测具有灵敏度高、适用范围广的特点，可同时分析活细胞及无细胞体系。其数据可直接反映药物与靶蛋白的结合能力，为药物筛选提供可靠依据。目前，该技术已成功应用于激酶抑制剂、抗癌药物及免疫调节剂的研发中。

通过细胞热转变检测，研究人员能够从分子层面解析药物作用机制，加速精准医疗与个性化治疗方案的开发。随着自动化设备的普及，该技术将进一步推动生命科学领域的创新突破。

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（细胞热转变检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。