细胞内过氧化氢检测

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细胞内过氧化氢检测实验方法与应用

检测样品 本次实验的检测样品为体外培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞、HEK293细胞等）。样品需在标准细胞培养条件下（37℃、5% CO₂）传代培养至对数生长期，实验前需根据研究目的对细胞进行特定处理（如氧化应激诱导、药物干预或基因编辑）。

检测项目 实验主要针对细胞内过氧化氢（H₂O₂）的含量进行定量或定性分析。过氧化氢是细胞内活性氧（ROS）的重要成员，其浓度变化与氧化应激、信号转导及疾病发生密切相关。检测项目还可拓展至H₂O₂的亚细胞定位或与其他生物分子的相互作用。

检测方法

1. 荧光探针法：采用DCFH-DA（2&39;,7&39;-二氯二氢荧光素二乙酸酯）作为荧光探针。DCFH-DA可穿透细胞膜，在细胞内酯酶作用下水解生成DCFH；后者与H₂O₂反应生成具有荧光的DCF，荧光强度与H₂O₂浓度呈正相关。
2. 化学发光法：基于鲁米诺（Luminol）或其衍生物与H₂O₂在辣根过氧化物酶（HRP）催化下的化学发光反应，通过光信号强度间接反映H₂O₂水平。
3. 酶联法：利用特定酶（如过氧化氢酶）分解H₂O₂，通过检测底物消耗或产物生成实现定量分析。

检测仪器

1. 荧光显微镜或共聚焦显微镜：用于观察H₂O₂在细胞内的实时分布及动态变化（如Nikon Eclipse Ti或Zeiss LSM 880）。
2. 酶标仪：适用于高通量样本的荧光强度或吸光度检测（如BioTek Synergy H1）。
3. 流式细胞仪：实现单细胞水平H₂O₂的快速定量分析（如BD FACSCanto II）。
4. 化学发光检测仪：专用于化学发光信号的捕获与分析（如Berthold Centro XS3）。

实验流程概述

1. 样品制备：细胞经处理后洗涤并重悬于缓冲液。
2. 探针加载：加入DCFH-DA（终浓度10 μM），37℃避光孵育20-30分钟。
3. 信号检测：根据实验需求选择显微镜观察或仪器定量分析。
4. 数据分析：通过软件（如ImageJ或FlowJo）处理荧光信号，结合标准曲线计算H₂O₂浓度。

注意事项

• 避免探针长时间光照或反复冻融。
• 需设置空白对照组及阳性对照（如H₂O₂刺激组）。
• 化学发光法需严格控制反应时间及温度。

应用领域 本方法广泛用于氧化应激机制研究、抗氧化药物筛选、癌症及神经退行性疾病模型构建等领域，为揭示H₂O₂的生物学功能提供可靠技术支撑。

关键词：细胞内过氧化氢、荧光探针、DCFH-DA、活性氧检测、氧化应激

通过上述方法，研究人员可高效、精准地评估细胞内H₂O₂水平，为疾病机制探索及治疗策略开发提供重要实验依据。

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（细胞内过氧化氢检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。