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核酸制品纯度检测标准及方法

检测样品

核酸制品纯度检测的样品主要包括：

1. DNA制品：如质粒DNA、基因组DNA、PCR扩增产物等；
2. RNA制品：如总RNA、mRNA、siRNA等；
3. 核酸提取物：通过不同方法（如柱式法、磁珠法）提取的核酸溶液或冻干粉末。

检测项目

核酸制品的纯度检测需涵盖以下关键指标：

1. 核酸纯度：通过吸光度比值（A260/A280、A260/A230）评估蛋白质及有机污染物残留；
2. 蛋白质残留：检测样品中是否含有影响下游应用的蛋白质杂质；
3. 有机溶剂残留：如乙醇、异丙醇等提取试剂的残留量；
4. 内毒素水平：针对医疗用途核酸制品需检测细菌内毒素；
5. 核酸完整性：通过电泳分析判断核酸是否降解。

检测方法

1. 吸光度比值法（分光光度法）

• 原理：利用核酸、蛋白质及其他杂质在特定波长下的吸光度差异计算纯度。
• 操作步骤： 取适量核酸溶液，用超纯水或缓冲液稀释至合适浓度，使用紫外分光光度计分别测定260 nm、280 nm和230 nm处的吸光度值，计算A260/A280和A260/A230比值。
• 合格标准：
  • DNA：A260/A280为1.8–2.0，A260/A230≥2.0；
  • RNA：A260/A280为1.9–2.1，A260/A230≥2.0。

2. BCA法检测蛋白质残留

• 原理：BCA试剂与蛋白质发生显色反应，通过比色法定量蛋白质含量。
• 操作步骤： 将样品与BCA工作液混合，37°C孵育30分钟，测定562 nm处吸光度，根据标准曲线计算蛋白质浓度。
• 合格标准：蛋白质残留量需低于检测限（通常≤50 μg/mg核酸）。

3. 气相色谱法检测有机溶剂残留

• 原理：通过气相色谱仪分离并定量乙醇、异丙醇等挥发性有机溶剂。
• 操作步骤： 样品经适当稀释后进样，根据保留时间和峰面积对比标准品计算残留量。
• 合格标准：有机溶剂残留量需≤0.5%（体积比）。

4. 琼脂糖凝胶电泳检测核酸完整性

• 原理：通过电泳迁移率判断核酸片段大小及降解程度。
• 操作步骤： 取1–2 μg核酸样品，加入上样缓冲液后点样于琼脂糖凝胶（DNA用1%凝胶，RNA用变性凝胶），电泳后通过成像系统观察条带清晰度。
• 合格标准：DNA应呈单一清晰条带（无拖尾），RNA需可见完整28S和18S rRNA条带。

检测仪器

1. 紫外分光光度计：用于测定吸光度比值（如NanoDrop系列）；
2. 酶标仪：配合BCA法检测蛋白质残留；
3. 气相色谱仪（GC）：分析有机溶剂残留；
4. 电泳系统：包括电泳槽、电源及凝胶成像仪；
5. 超微量核酸分析仪：快速检测微量核酸样品的纯度与浓度。

通过上述标准化的检测流程，可全面评估核酸制品的纯度及适用性，确保其在科研、诊断或治疗中的可靠性。

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实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（检测核酸制品纯度检测标准）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。