单细胞蛋白检测

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<h1>单细胞蛋白检测技术的研究与应用</h1> <h2>检测样品</h2> 本研究选取了三种典型生物样本作为检测对象：1）小鼠肝脏原代细胞培养物；2）人类肺癌组织单细胞悬液；3）健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）。所有样品均采用胶原酶消化法制备，并通过40μm细胞滤网去除细胞团块，最终细胞活性经台盼蓝染色确认＞95%。 <h2>检测项目</h2> 检测涵盖四大类蛋白质指标：1）细胞表面标志物（CD45、CD19、EpCAM）；2）细胞因子分泌水平（IL-6、TNF-α、IFN-γ）；3）细胞周期调控蛋白（Cyclin D1、p53）；4）信号通路关键蛋白（磷酸化AKT、ERK1/2）。同时进行细胞代谢活性关联分析。 <h2>检测方法</h2> 采用多重荧光标记流式细胞术与微量蛋白质组学联用方案。具体流程包括：1）细胞表面抗原抗体孵育（4℃避光30分钟）；2）胞内蛋白固定破膜处理（含0.1% Triton X-100的PBS缓冲液）；3）质谱级胰酶酶解（37℃水浴16小时）；4）液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）数据采集。质量控制采用标准肽段内标校正。 <h2>检测仪器</h2> 实验使用BD LSRFortessa X-20流式细胞仪完成表型分析，配备405nm、488nm、640nm三激光系统。质谱检测采用Thermo Fisher Q Exactive HF-X组合型质谱仪，搭配Dionex Ultimate 3000液相系统。数据分析使用MaxQuant 2.1.0软件进行蛋白质定量，FlowJo 10.8.1处理流式数据。 <h2>技术优势</h2> 本方案实现单细胞水平10^-18 mol/L级蛋白检测灵敏度，单个样本可同时分析50+蛋白标志物。通过同位素标记校正，批次间变异系数控制在8%以内。特别设计的微流控芯片前处理模块，将样本消耗量降低至500细胞/检测，为珍贵临床样本提供可行性。 <h2>结论</h2> 该检测体系在肿瘤微环境解析和免疫治疗监测中展现出重要应用价值，单细胞蛋白组数据的空间分辨率较传统方法提升3个数量级。未来可通过增加抗体-核酸条形码偶联技术进一步扩展检测通量。
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实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（单细胞蛋白检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。