体外微核检测

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体外微核检测实验报告

检测样品

本次实验的检测样品为体外培养的人外周血淋巴细胞（Human Peripheral Blood Lymphocytes, HPBL）及中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1细胞）。样品来源于健康成年志愿者捐献的外周血及实验室标准细胞库，所有操作均符合伦理规范及生物安全要求。

检测项目

检测项目为体外微核形成率测定，通过分析受试物对细胞遗传物质的损伤程度，评估其潜在的致突变性及遗传毒性。实验同步检测细胞存活率，以排除细胞毒性对结果的干扰。

检测方法

1. 细胞培养与染毒处理

   • 人外周血淋巴细胞经分离后，使用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基进行培养，并添加植物血凝素（PHA）刺激细胞分裂。
   • CHO-K1细胞于含5% CO₂的37℃培养箱中培养，使用DMEM培养基（含10% FBS）。
   • 将不同浓度的受试物（如化学物质、药物或环境污染物）分别加入细胞培养体系，同时设置阴性对照（溶剂对照）及阳性对照（环磷酰胺）。

2. 细胞收获与固定

   • 染毒处理后，收集细胞并离心，采用低渗液（0.075 M KCl）膨胀细胞膜，随后用甲醇-冰醋酸（3:1）固定细胞。

3. 染色与镜检分析

   • 固定后的细胞滴片，经吉姆萨染色（Giemsa Stain）处理，显微镜下观察微核形成情况。
   • 每实验组至少分析2000个双核淋巴细胞或1000个CHO细胞，统计微核率（微核数/细胞总数×100%）。

4. 数据统计

   • 采用单因素方差分析（ANOVA）比较实验组与对照组的微核率差异，结合细胞存活率数据综合评价遗传毒性风险。

检测仪器

1. 生物安全柜（Class II A2型）：用于细胞操作及样品处理，确保无菌环境。
2. CO₂细胞培养箱（Thermo Scientific, HERAcell 150i）：提供稳定的温度（37℃）、湿度及气体环境。
3. 倒置显微镜（Olympus CKX53）：观察细胞形态及微核形成。
4. 流式细胞仪（BD FACSCanto II）：辅助分析细胞存活率及凋亡情况。
5. 酶标仪（BioTek Synergy H1）：检测细胞毒性相关指标（如MTT法测定细胞活力）。

结论

体外微核检测是评估化合物遗传毒性的经典方法，具有灵敏度高、操作标准化等优势。本实验通过严格的样品处理及数据分析，为受试物的安全性评价提供了科学依据。后续研究可结合体内实验进一步验证结果。

（本文内容仅为实验流程示例，实际检测需依据具体标准及法规要求。）

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（体外微核检测）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。