B6-PD1tm1小鼠,动物试验

PD1小鼠是通过CRISPR-Cas9技术对在C57BL/6J背景的PD-1基因敲除而获得纯合突变小鼠。

粗蛋白≥23.0%、粗脂肪≥5.0%、粗灰分≤7.0%、粗纤维≤5.0%、水份≤10%、钙1.4%～1.5%、磷1.0%～1.1%、赖氨酸≥1.32%、蛋氨酸+胱氨酸≥0.78%

1. 生长曲线

2、解剖学特性与背景品系C57BL/6J相同。3、繁殖特性纯合子之间同胞兄妹间繁殖，繁殖能力一般，每胎产5-7只。4、自发异常

不规则脾 脾脏黑色素沉积

1、 PD-1 KO小鼠的制备背景小鼠C57BL/6J为近交系小鼠，是经过全基因组测序的小鼠，具有实验结果精度高、可比性好、应激反应均一等特点，是基因工程小鼠常用品系。基因设计信息Pdcd1 programmed cell death 1 [ Mus musculus (house mouse) ]，Gene ID: 18566

2、 敲除设计设计敲除第二，三外显子。3、作用靶点设计GGAACATCTTGAACAGGAGTGGGM- PD1-EA1-gRNA up: TAGGAACATCTTGAACAGGAGTM- PD1–EA1-gRNA down: AAACACTCCTGTTCAAGATGTTGGAAGAGCCCTGCTTGTTGGAGGM- PD1-EA2-gRNA up: TAGGAAGAGCCCTGCTTGTTGGM- PD1–EA2-gRNA down: AAACCCAACAAGCAGGGCTCTTGGAACTCCCCGTTAGTAAATGGGM- PD1-EB1-gRNA up: TAGGAACTCCCCGTTAGTAAATM- PD1–EB1-gRNA down: AAACATTTACTAACGGGGAGTTGGGAGGACATTCCTCCACTAGGGM- PD1-EB2-gRNA up: TAGGGAGGACATTCCTCCACTAM- PD1–EB2-gRNA down: AAACTAGTGGAGGAATGTCCTC4.显微注射和基因型鉴定4.1显微注射①超数排卵：150只3-4周龄c57雌鼠注射激素进行超排。②受精卵注射：取约350枚受精卵进行注射。③雄鼠结扎：制作30只8周龄输精管结扎的c57雄鼠。④受体鼠制备：8-10周龄ICR雌鼠与结扎的ICR雄鼠交配后选取见栓的雌鼠。⑤胚胎移植：将注射后的受精卵移植到受体鼠输卵管壶腹部（移植一次， 350枚卵，15只受体鼠）。4.2 F0代小鼠基因鉴定引物：M-PD1-F1: CACTCCCACCTCACTATCCCACT 63.8M-PD1-R1: ACCAGAGTGTCGTCCTTGCTTC 63 WT=1819bp 经过基因型鉴定获得2只敲除小鼠(1, 4)。

1 del 492bp

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4 del 1357 bp 留 ,繁殖一代

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