B6-IL6tm1小鼠,动物试验

获取试验方案？获取试验报价？获取试验周期？

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试望见谅。

基本信息

品系名称：B6-IL6^tm1小鼠

英文名称：B6-IL6^tm1 mouse

疾病名称：肿瘤、自身免疫疾病、炎症

相关基因：IL-6

背景品系：C57BL/6J

遗传类型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代数：NA

研究用途：用于肿瘤、自身免疫疾病、炎症等及信号转导方面的研究。

饲养环境：屏障或隔离环境

培育单位：北京华阜康生物科技股份有限公司、中国医学科学院医学实验动物研究所

保种单位：中国医学科学院医学实验动物研究所

资源鉴定：否

鉴定日期：暂无介绍

特征描述

 

IL-6的产生细胞及表达 机体内的淋巴和非淋巴组织细胞能组成性地表达IL-6和 或在几种不同刺激条件下反应性地 表达IL-6，如人成纤维细胞、单核细胞和一些T淋巴细胞 、T24磅肮癌细胞以及心脏粘液瘤细胞都特组成性地分泌有活性的IL-6；B细胞也能表达IL-6，而且在TNF， lL-1、血小板源性的生长因子 (Pletelet—derived growth factor即 PDGF)． Poly(C)．Poly(I)和其它类型的干扰素等协同下， 表达水平增强：T淋巴细胞在PHA或 ConA刺激下，同样增 强IL-6的表达， TNF还能增强人体一些瘤细胞表达IL-6。 随着基因克隆方法的应用， 已能在大肠杆菌或哺乳动 物的细胞中高效表达重组的IL-6(Recombinant interleukin-6， rIL-6)。

Baucer等分别研究了人外周血单核细胞 (PBM C )中 IL-6 mRNA表达的动力学过程 。Horii用克隆1L-6cDNA的TaqI—BanⅡ酶切寡核苷酸片段当作操针，利用 Northern 印迹和点杂交方法测定了mRNA含量， 表明PBMC中 IL-6mRNA双相表达。第 1峰约在第 4小时，第2峰约在第48小时，这是PBMC的不同亚群的细胞表达IL-6 mRNA动力学过程的表现 。 巨噬细胞即使未受到抗原刺激时约在第5小时有mRNA生成，其可能是 属于组成性表达；T和B细胞受 分 裂原刺激后第48小时表达之。双相表达的意义可能在于机体在不同时期都能产生IL-6， 以满足免疫应答的需要。

IL-6蛋白质分子鉴定表明：其分子量约为26KD，是 由184个氨基酿组成的糖蛋白，其氨基酸序列与β1-IFN和 G-CSF有部分同源性； 人和鼠的 IL-6蛋白质之间有6％ 的同源性；其意义有待阐明。目前纯化的rIL-6比活性可达到6．3×10。U/mg【1】。

IL-6的生物学活性

天然IL一6(Native IL-6， nlL-6)含量极少 ，纯化困难，所以对它的研究受到限

制，基因克隆和高效表达的 rIL-6解决了这个问题 。一般来说，rIL一6基 本上具有nIL-6相同的生物学活性，不过已发现一点例外，由大肠杆菌表达无糖化的rIL-6无抗病毒活性 ，这可能与 rIL-6的表达体系有关【1】。

IL-6影响B细胞的增殖和分化：Mueaguchl报道 IL-6在B细胞增殖和分化过程中起调节作用，它是诱导B细胞分泌Ig的必需因子之一，主要直接影响成熟的B细胞产生 免疫球蛋白IgM 、IgG和 IgA，对M型 Ig无选择性 。这一点与其它自细胞介素不同，如IL～4使休止期B细胞分泌IgG 和IgE；1L-5使激活的B细胞选择性分泌lgA。在培养的受PWM激活的细胞第4天 (总共培养8天)，抗IL-6的抗体仍能特异性阻断IL-6引起的抗体分泌作用， 但不能抑制PWM激活的B细胞增殖，提示：(1)IL-6本身不能单独使B细胞增殖(2)抗IL-6抗体是通过特异的非细胞毒作用， 阻断B细胞 产 生 Ig： (3)IL-6可以作用于分化成熟的B细胞， 使之分泌抗体。神经白介素(neuro leukln)能使PWM激活的B细胞产生Ig， 但这种作用仅限于B细胞早期分泌Ig反应。有人报道1L-6还参与调节B细胞 增 殖 过 程，IL-6的作用是通过它与分布在B细胞上的受体结合实现的。总之白细胞介素对B细胞的作用是复杂曲，现仅了解在B细胞增殖和分化的一系列过程中，IL-4(又 称B cell stimulatory factot-1， BSF-1)诱导休止期 的 B细胞激活；IL-5(又称B cell growth factor，即BCGF-Ⅱ)参与激活B细胞的生长成熟过程；IL-6使分化成熟的B细胞分泌抗体。

IL-6对T细胞的作用最初认为 IL-6只是特异作用于B细胞，后来证实它也可作用于T细胞。已知T细胞在抗原或分裂原激活后，必须有辅助信号存在，才能产生增殖反应 。Tosato等近来发现IL-6就是起这种辅助信号作用，它能促进PHA或ConA 激活的T细胞增殖生长，后者是具有 T4和 T3表型的T淋巴细胞 IL-6的促进作用不需要任何辅助细胞参与，说明这是IL-6与PHA或ConA共同直接作用于T细胞的结果， 且这种靶细胞是休止期T细胞。深入研究揭示抗IL-2受体的抗体不能阻断IL-6诱导的T细胞的增殖过程。建议IL-6的作用并不是通过刺激T细胞生IL-2来实现的； 推测 IL-6可能作为一种T细胞生长因子或促进因子 (Progression factor)， 而不是通过诱导T淋巴细胞产生一种自分泌生长因子(Autocrine growth factor， 如IL-4)，再 由后者发挥促进T细胞增殖，Okada等支持这种观点。Baroja也报道T细胞受到抗T细胞单克隆抗体 (即抗CD28单克隆抗体 )刺激后 ，IL-6与 IL-l作用类似，发挥辅助信号作用，促进T淋巴细胞的激活， 从而产生对 IL-2的应答能力。 此外，Lotz等证实IL-6也可诱导人和鼠受PHA处理的胸腺细胞增殖。

对造血祖细胞的作用：人rIL-6影响小鼠粒-巨系祖细胞的分化过程。通过体外细胞 培养发现正常小鼠骨髓细胞在 5～ l00ng/ml浓度的rlL-6刺激下， 形成含中性粒细胞和巨噬细胞的细胞集落，在20ng/m1浓度时，rlL-6作用即基本饱和， 通过与人rG-CSF比较 ，它们的生物学活性有些相似，不过由rG-CSF形成的细胞集落主要含有 中性粒细胞 。5-FU处理的小鼠脾细胞经rIL-6作用后可形成二到四种细胞组成的不 同形式的集落，其中的细胞类型有中性粒细胞、 巨噬细 胞 、嗜碱细胞、肥大细胞和巨核细胞。单细胞转移实验(single cell transfer experiment)结果提示rIL-6是直接作用于小鼠粒一巨系祖细胞，不需要淋巴细胞的辅助，就可引起它向巨噬细胞、粒细胞等方向分化成熟。但是同样条件下的 rlL-6不能支持入骨髓细胞形成细胞集落。然而 ，rG—CSF却能使人的骨髓细胞形成含有中性粒细胞和巨噬细胞组成的细胞集落 将rlL-6加入含有rG-CSF的培养皿中，也不能增强或改进 rG-CSF形成的细胞集落故认为人的IL-6不能独立地影响髓系造血过程， IL-6可能需要与其它因子 (如IL-3)共同作用，促进细胞集落形成或增强血细胞分化的功能。不过确切机理尚待阐明。

IL-6参与机体的应急过程：IL-6作为肝细胞刺激因子，主要诱导培养的肝细胞产生 急性反应期蛋白质合成。 rIL-6在 兔体内可引起发热 。Nijateu等利用 H 标记的 IL-6的B细胞系测定急性反应期病人血清中IL-6，结果是在开始几小时内，IL-6比正常情况下高出 2～ lOO倍，而且 CRP和AAT(α2-antitrypsin)是逐渐上升；当发热和IL-6水平都降低时，CRP仍然很高，这表明在急性反应期 (如损 伤、炎症和感 染)，IL-6起着一定的作用。

IL-6参与风湿病、 自身免疫病等 病变发生过程已有许多证据表明，在一些感染、风湿病和自身免疫性疾病的发生过程率 ，IL-6也起着重要作用。尤其是IL-6可以和 IL-1、TNF一起，共同参与上述病理过程，其机理可能是：体内巨噬细胞在吞噬或胞饮抗原物质，本身可产生一些细胞因子，如IL-6，还有IL-1和TNF，其中IL-6和 TNF又可作用于血管的内皮细胞，后者也能产生IL-1,通过血液流动，上述细胞因子分别作用于全身或身体某一器官内相应的靶细胞；通过结合受体而引起一系列的免疫应答 在正常时，起到抗感染作用而在病理情况下，可导致全身性风湿病，糖尿病和甲状腺疾患等多种自身免疫病。

IL-6的其它作用：天然IL-6作为 IFN-β2， 具有干扰素共同所具有的抗病毒活性，此外， 能促进鼠B细胞杂交瘤细胞和浆细胞瘤的生长；还有抑制成纤维细胞的生长作 用。近几年来，惊奇地发现IL-6与某些肿瘤细胞之间有一定关系，如膀胱癌细胞、 心脏粘液瘤细胞均能分泌 IL-6；更有甚者人体多发性骨髓瘤细胞依赖自身的1L-6作为 自分泌刺激因子才能生长。因而，阐IL-6与临床上这些疾病的关系对于防治疾病将具 有深远的意义。

L-6/IL-6R 复合体在免疫反应的多个过程中均 可发挥作用。这一复合体可促进适应性免疫反应的 发生；抑制 Th1、Treg 的分化，促进 Th2、Th17 细胞的 分化；并且在 B 淋巴细胞增殖分化为产生抗体的浆 细胞及 Ig 类别转换中起重要作用[15]。

1、介导固有免疫转化为适应性免疫 炎症是机体抗感染及引起组织损伤的重要过程之一。从固有免疫向适应性免疫转变是炎症反应的一个重要过程，这一转变的标志是从中性粒细胞浸润向单核细胞浸润转变。IL-6 在这一过程中发挥重要的作用。IL-6可控制白细胞的招募，实验表明，IL-6 可促进中性粒细胞的凋亡；并且 IL-6 可诱导内皮细胞表达粘附 分子并且促进单核细胞趋化因子的产生，因此促进单核细胞在炎症及感染部位的聚集。

2、在 T 细胞分化中的作用

2.1 IL-6 与 Th17 细 胞 的 相 互 作 用 Th17 细 胞 是CD4+ T 细胞的一个亚群，与炎症及自身免疫病密切相关，多种前炎症细胞因子在 Th17 细胞发生中起重 要作用，如 TGF-β，IL-6,IL-23 。IL-6 在 Th17 细胞分化及 IL-17 发挥促炎作用过程中占有重要地 位。Liu 等在实验中证实：当加入 IL-6 时，IL-17 及 磷酸化的 stat3 的量明显增多 。亦有研究表明 IL-6表达上调可扩增 Th17 细胞群的数量；IL-6 缺陷可抑制许多自身免疫病的形成，如 IL-6-/-的 F759 小鼠不能形成 RA，这表明 IL-6作为 IL-17 的上游可调节诱导许多自身免疫病的发生。同时 IL-6 也是 IL-17 下游的一个重要的靶目标。IL-17 通过 NF-κB 信 号可引发 IL-6 产生的正反馈环，IL-6 产生增加，进而诱导自身免疫病的发生。IL-6 及 Th17 促进 IL-6表达的协同效应由 stat3 介导。在 F759 小鼠中 IL-17引发 IL-6 产生的正反馈环增加。在 IL-17-/-的F759小鼠中 IL-6 仍可诱导 RA 的产生，IL-6-/-的 F759 小鼠中 IL-17 不能诱导产生RA。这表明 IL-17 通过引发 IL-6 表达的正反馈环，使 IL-6 过表达，从而使F759 小鼠产生A。在体内也证实 IL-17 可增加血 清中 IL-6 的浓度。另外研究发现 IL-17 与 IL-6 可协 同 刺 激 各 种 NF-κB 靶 基 因 的 表 达 如 KC、MIP2、IκB-δ，IL-17 以 IL-6 剂量 依赖方式介导 上 述 基 因 的表达。这说明 NF-κB 可直接或是间接与 stat3 相互作用，通过刺激 NF-κB 信号通路，病毒感染可引发 IL-6 表达的正反馈环，促使自身免疫病的发生。总之，IL-6 表达增加一方面增 加 Th17 细胞亚群数量，另外增加 IL-17 引发的 IL-6 产生的正反馈环。

2.2 对 T 细胞其他亚群的影响 IL-6 对 CD4+T 细 胞的影响是多样的。IL-6 通过增加细胞因子信号沉默子的表达阻断 INF-γ，抑制 Th1 分化；通过上调NFATC2 及 c-maf，促进Th2 细胞的分化；而且 IL-6 可下调调节性 T 细胞的产生。

3 对 B 细胞分化及抗体产生的影响 IL-6 曾被看做是 B 细胞分化因子，B 细胞生长因子。IL-6 确实在 B 细胞的发生及抗原特异性抗体的产生过程中发挥重要作用。

3.1 可促进 RAG 的表达 RAG 在 B 细胞的发生及各组分形成过程中均发挥重要作用。RAG 酶 1、2 通过聚集免疫球蛋白基因组可变区 V、D、J 基因，调节 基因的随机重排、替换及选择。继发性 D、J 基因重排可修正 BCR 的特异性，从而启动更有效的免疫反应。先前认为 RAG 的二次重排仅局限于不成熟的B 细胞中。近年研究发现，在激活的 B 细胞及生发中心中也存在 RAG 的产物。Hillion 等[19]研究发现，用 CD40 及抗 IgM 联合刺激 B 细胞，B 细胞可分泌IL-6，并且表面 IL-6R 的表达上调，IL-6 又可诱导RAG 基因的表达，IL-6 诱导 RAG 基因表达的机制仍然未知，可能是 IL-6 可激活一种转录因子，该转录因子具有启动 RAG 基因转录的功能，或者 IL-6激活相应转录因子的顺式作用元件，抑制沉默子（具有抑制 RAG 转录的特性）。另有研究表明 RAG 在清除自身反应性 B 细胞的过程中 也发挥重要作用 。RA 患者的成纤维细胞样滑膜细胞（FLS）可向 B 细胞提供 2 种信号以激活 RAG 酶 1、2，一种是 FLS 膜 表达的 BAFF，一种是 FLS 产生的 IL-6，在炎症性关节中这两种细胞因子的出现可促进一种 B 细胞的产 生，该 B 细胞可产生高亲和力的自身抗体，这进一步说明了 B 细胞耐受丧失的原因。

3.2 在抗体产生过程中的作用 体外研究表明 IL-6 可诱导浆细胞的分化；体内研究证实 IL-6 在抗体产生及类别转换中起重要作用。高表达 IL-6 的小鼠，浆细胞生成增加，用肝抗原免疫 IL-6 缺陷小鼠， 抗原特异性 IgG1、IgG3 水平下降，而 IgM 不受影响。IL -6 诱导 B 胞 产生抗体依赖 IL -21的辅助 ，而IL-6 又是诱导记忆 T 细胞、naive T 细胞产生 IL-21所必需的。而且在未激活的流感病毒中应用 IL-6， 可观察到病毒特异性抗体产生增加，这一过程也需要 IL-21 的辅助。总之，IL-6 通过诱导 IL-21 的产生，促进 T 细胞辅助B细胞的能力，进而促进 B 细胞产生抗体。

4 免疫系统成分对 IL-6 产生的影响 不 仅 IL-6可通过一系列途径增强免疫反应，免疫系统对 IL-6 的产生亦有一定影响。用适应性免疫或固有性免疫 受体刺激 B 细胞，B 细胞产生的细胞因子可增加，例如用 TLR 及 CD40 刺激 naive B 细胞，两者可协同诱导 IL-6 的产生。这一过 程依赖 JNK 途径的激活，CD40 可诱导 JNK 的激活，随后由 P1: c-jun 同源 二 聚 体 驱 动 IL -6 的 产 生 ，TLR7 信号可显著增加CD40 介导的 IL-6 的产生。此外许多其他的细胞因 子 如 TNF-α 及 IL -6 家族的其他 成员均可作用于IL-6 的上游，诱导 IL-6 的产生。这解释了以IL-6信号为靶目标治疗自身免疫病会有较好的临床疗效。IL-6 产生增加一方面有积极的生理作用，通过促进B细胞的增殖，促进抗体的分泌，下调调节T细胞而使免疫反应的效率提高；细胞因子产生的增加，在抗感染的同时也可使自身免疫病的发病风险加大，如 RA，在 RA 患者血清及受累关节的滑液中均可观察到 IL-6 及 IL-6R 浓度升高，并且浓度升高与患者的临床表现的轻重相关【2】

大量基础和临床研究证实通过阻断IL-6/IL-6R信号通路可以减轻排斥反应,特别是慢性抗体介导的排斥.因为慢性抗体介导的排斥是目前导致移植物失功的重要因素且无其他有效治疗方法,所以通过阻断IL-6/IL-6R信号通路减轻慢性抗体介导的排斥方案有望在临床进行进一步验证和推广,改善移植物预后【3】

肿瘤是全球主要的公共卫生问题之一,肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存的重要环境,可促进肿瘤的进展和细胞转移。白细胞介素-6/白细胞介素-6受体(IL-6/IL-6R)信号通路在正常体内平衡和免疫反应中具有广泛的生物学活性,是促进肿瘤进展的重要细胞因子。目前,已有多项研究阐述了 IL-6在各种肿瘤中的作用,更有相应的临床试验得以证实。已知,IL-6传导信号,必须与IL-6R结合,通过gp130向胞内传递信号。然而,IL-6R对各种肿瘤的预后作用的研究却相对较少。因此,本研究着眼于IL-6RmRNA,探讨IL-6RmRNA表达在卵巢癌、肺癌和乳腺癌中潜在的临床和生物学功能。研究结论1、卵巢癌、肺腺癌、乳腺癌患者肿瘤组织中IL-6RmRNA水平与患者的预后有关,IL-6RmRNA水平越高,患者预后越好,可被用作其预后指标。在肺鳞癌患者中,其差异无统计学意义,但其95%CI下限接近1.00(0.98)。由于纳入分析的各个数据集中肺鳞癌患者样本量较少,该结论需要更大样本量的研究验证。2、在不同肿瘤或不同亚型的肿瘤中,IL-6R及其相关基因主要富集的生物学过程或通路不完全相同,IL-6、IL-6R以及gp130之间的相关性以及IL-6R mRNA对肿瘤患者的预后作用也不同。3、本研究不同肿瘤纳入分析的数据集个数相差较大,尤其是肺鳞癌数据集,相对数据集数量较少,且各个数据集样本量较少。需要更多包含多种重要临床参数特别是化疗信息的数据来进一步验证以及探讨IL-6R mRNA与恶性肿瘤预后之间的关系【5】。初步探讨IL-6和IL-6R与脑胶质瘤发生发展的关系.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白细胞介素6(IL-6)和IL-6受体(IL-6R)基因在脑胶质瘤组织标本和正常人脑胶质细胞中的表达.结果:30例脑胶质瘤组织标本中有24例(80.0%)表达IL-6、26例(86.7%)表达IL-6R、22例(73.3%)同时表达IL-6和IL-6R.人脑正常胶质细胞仅有IL-6基因弱表达,而无IL-6R表达.结论:脑胶质瘤可能存在与肿瘤的恶性增殖有关的IL-6/IL-6R自分泌或旁分泌环路【4】。导向杀伤是治疗白血病的必然趋势 ,而IL-6/IL-6R系统是细胞因子 受体导向治疗的重要部分.IL-6R在很多肿瘤细胞上都有表达 ,如多发性骨髓瘤,前列腺癌,白血病等【7】

研究在恶性单克隆免疫球蛋白增殖病和良性多克隆免疫球蛋白增殖病患者血清中,IL-6/IL-6R对免疫球蛋白异常增生的调节作用.方法:收集恶性浆细胞瘤患者共37例,SLE患者33例,健康体检者33例,采用速率散射比浊法测定血清中免疫球蛋白成分及轻链水平,采用ELISA法检测血清中IL-6/IL-6R的水平,所有数据采用SPSS统计软件进行分析.结果:浆细胞瘤患者37例,免疫球蛋白呈恶性单克隆增殖,其中多发性骨髓瘤27例(IgG型19例,IgA型8例),巨球蛋白血症2例,轻链病8例,其血清中IL-6和IL-6R的水平较正常对照组均显著增高(P〈0.05),组间无显著性差异;SLE患者33例,血清中免疫球蛋白呈良性多克隆增殖,其血清中IL-6水平较正常对照组显著增高(P〈0.05);恶性单克隆增殖病患者血清中的IL-6和IL-6R水平又显著高于良性多克隆增殖病患者(P〈0.05).结论:IL-6刺激骨髓瘤细胞分泌异常免疫球蛋白及片段,参与了体液免疫调节,而在SLE患者组,Th1,Th2细胞功能偏移,以Th2细胞亢进为主,产生大量IL-6,它介导免疫调节反应,致B淋巴细胞活跃产生大量自身抗体及免疫球蛋白.IL-6/IL-6R水平的检测对于临床病情观察和预后判断有一定参考价值,如能设法阻断其作用途径,将为临床治疗提供前景【6】

IL-6是一种多效性前炎症细胞因子,有多种生物活性,包括介导炎症反应,免疫反应等。IL-6在许多炎症性疾病中高表达,如RA,SLE,Crohn’s病等。IL-6的产生受多种因素的调节如NF-κB,Lin28,let-7microRNA,IL6阳性反馈环,JunB等。IL-6受体(IL-6R)包括特异性IL-6Rα及IL-6Rβ即IL-6家族成员共有的信号转导蛋白gp130。IL-6可通过两种途径向细胞内传导信号:传统途径及反式信号途径,LMO4可参与反式信号途径的调节。IL-6/IL-6R在T、B细胞的发生中起重要作用。IL-6可抑制Th1、Treg的分化,促进Th2的分化;而且IL-6是CD4+T细胞分化为Th17细胞所必需;在B细胞中IL-6可诱导RAG基因的表达,促进抗体的产生。近年来越来越多的证据表明IL-6/IL-6R与RA存在密切关联性。RA患者血清及滑液中IL-6及sIL-6R的浓度升高,并且IL-6水平与疾病活性及临床表现密切相关,这可以解释RA患者的许多症状。因此可将IL-6信号转导途径相关的分子作为RA的治疗靶点,目前也研制出几种药物,其中之一为抗sIL-6R的人源化抗体Tocilizumab。临床试验中,该药可减轻RA患者的症状,降低疾病活性,可是也带来一定的副作用,这就限制了该药在临床中的应用。正在研制的另一种抗IL-6R的抗体可能为干预RA带来新的希望【7】。

 

动物简介

营养成分

生物学特性

遗传信息

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（B6-IL6tm1小鼠,动物试验）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。