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流式细胞检测细胞凋亡
细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡方式,流式细胞检测细胞凋亡常用的方法有以下几种:
1. Annexin V/PI双染法:该方法利用细胞凋亡时磷脂酰丝氨酸(PS)外翻到细胞膜外侧的特性,通过Annexin V结合PS和荧光素碘化丙啶(PI)用于检测细胞凋亡。Annexin V结合附在胆碱失配磷脂根化物上的标签,而PI则用于区分凋亡细胞和坏死细胞。
2. TUNEL法:该方法利用转移酶介导的尿嘧啶(dUTP)末端标记(TUNEL)技术,在细胞凋亡过程中,将dUTP缺失的DNA片段与荧光标记连接,用于检测凋亡细胞。此方法可以与流式细胞仪配合,检测细胞核内的正常DNA与凋亡DNA的比例。
3. 刺激凋亡受体:细胞凋亡受体(如Fas)在细胞凋亡过程中起重要作用。通过刺激含有特定抗体的磁珠与细胞表面的凋亡受体结合,可以用流式细胞术分离并分析凋亡细胞。
4. JC-1染色法:JC-1是一种荧光染料,可以用于检测线粒体的膜电位。凋亡细胞线粒体膜电位的下降可以通过JC-1的荧光颜色变化来测定。
5. DNA染色法:通过用DNA染色剂(如Hoechst 33342)染色,利用流式细胞仪测定细胞内DNA含量的稳定程度。凋亡细胞的DNA含量通常会下降。
6. Caspase活性测定:细胞凋亡过程中,一种重要的酶是半胱天冬氨酸酶蛋白酶(caspase)。通过测定凋亡细胞内caspase活性的变化,可以判断凋亡程度。
7. 涂片染色法:将细胞涂片固定后,使用染色剂(如Giemsa染色液)染色,观察细胞形态学改变来判断凋亡。
8. 细胞凋亡核酸片段化检测:利用DNA片段化检测试剂盒(如TdT-mediated dUTP nick end labeling assay)检测凋亡细胞内DNA断裂产生的核酸片段,通过流式细胞仪进行定量分析。
9. 凋亡相关蛋白检测:通过流式细胞仪或Western blot等方法,检测凋亡相关蛋白(如Bcl-2、Bax、Caspase-3等)的表达水平变化,从而判断细胞凋亡程度。
10. 基于细胞膜事件:通过检测细胞膜的改变,如细胞膜电位、细胞膜透性与微管变化等,来判断细胞凋亡的发生。
流式细胞仪器
细胞凋亡检测
细胞分析仪
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细胞自动计数仪
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细胞凋亡流式技术
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细胞膜电位检测仪
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细胞形态检测仪
细胞内大分子动态检测仪
离体器官再灌流系统
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