NOD-PrkdcscidIL2rgtm1小鼠,动物试验

NSIG小鼠是通过利用CRISPR/Cas9 技术，对NODSCID小鼠的IL2rg基因进行靶向敲除制备而成。 表现为T、B、NK细胞严重联合免疫缺陷。

粗蛋白≥23.0%、粗脂肪≥5.0%、粗灰分≤7.0%、粗纤维≤5.0%、水份≤10%、 钙1.4%～1.5%、磷1.0%～1.1%、赖氨酸≥1.32%、蛋氨酸+胱氨酸≥0.78%

1、生长曲线

2、解剖学特性

无胸腺胸腺正常的动物（左）与NOD SCID（右）

3、繁殖特性同胞兄妹交配繁殖方式，繁殖能力较强，每胎产7-10只。4、自发异常

胸腺瘤（左：正常NOD SCID,右：胸腺瘤NOD SCID）

5、血液学指标

NOD SCID小鼠血生理指标

NOD SCID小鼠血生化指标

Prkdc（protein kinase, DNA-activated, catalytic polypeptide）基因是淋巴细胞发育过程中V（D）J区段重组的必须蛋白激酶的编码基因，Prkdcscid是Prkdc基因点突变，此突变可导致蛋白的翻译功能提前终止。在携带Prkdcscid突变的SCID小鼠，其淋巴细胞发育过程中，因其抗原受体基因重组障碍，导致其不能正常重组，导致其无法产生正常功能的受体蛋白，使其淋巴细胞在成熟之前死亡或被机体清除，表现为缺乏功能性T、B细胞，无法介导细胞和体液免疫。

Il2rgnull： Interleukin-2受体的gamma链（IL-2R γc，又称CD132）是重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基，敲除该基因后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是其NK细胞的活性完全丧失。

1、靶基因位点选择

设计及构建质粒：

利用CRISPR/Cas9技术，针对目的基因的插入位点寻找靶序列，根据靶序列信息设计针对该位点的guide RNA，经活性检测后，将具有活性的guide-RNA和Cas9体外转录成RNA，通过显微注射将guide-RNA，Cas9 mRNA和重组DNA注射到受精卵中，从后代中筛选获得阳性小鼠。

M-IL2rg–E1-gRNA up: TAGGATCTGATAATAATACATTCC

M- IL2rg–E1-gRNA down: AAACGGAATGTATTATTATCAGAT

M-IL2rg–E2-gRNA up: TAGGCAACAAATGTCTGGTAGAGC

M- IL2rg–E2-gRNA down: AAACGCTCTACCAGACATTTGTTG

3、 显微注射及胚胎移植

gRNA经体外合成、转录后与Cas9 RNA一起注射入C57BL/6小鼠受精卵细胞，受精卵细胞移植供体ICR小鼠。

经过F0代基因型鉴定，获得2只F0 KO 小鼠（6，8），具体测序结果见附件，由于敲除片段较小，请辅助测序进行进行基因型鉴定。目前小鼠可以运走。

敲除片段：

6 del 2bp 杂合子

Ggtaggaaacctaggaccagagggagttgttgagaggaaggctatggggaaagggcctgctagtgctcactataatgactaaaacgaagtgtgcagagggggaggggaaggctctctgcctcactgctgcttcttctgaccaag

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8 del 5 bp 杂合子

Ggtaggaaacctaggaccagagggagttgttgagaggaaggctatggggaaagggcctgctagtgctcactataatgactaaaacgaagtgtgcagagggggaggggaaggctctctgcctcactgctgcttcttctgaccaaga

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ataccaggtcccagttctctgccccccaactcctctgtc

敲除后影响翻译，生成终止密码子