B6-Ccr7tm1小鼠,动物试验

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基本信息

品系名称：B6-Ccr7^tm1小鼠

英文名称：B6-Ccr7^tm1 mouse

疾病名称：癌症、肿瘤、炎症

相关基因：Ccr7

背景品系：C57BL/6J

遗传类型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代数：NA

研究用途：用于研究癌症、肿瘤、炎症及信号转导方面的研究。

饲养环境：屏障或隔离环境

培育单位：中国医学科学院医学实验动物研究所

保种单位：北京华阜康生物科技股份有限公司、中国医学科学院医学实验动物研究所

资源鉴定：否

鉴定日期：暂无介绍

特征描述

趋化因子是一类细胞因子或细胞分泌的信号蛋白家族，分子量约为 8-12 kd 的可溶性小分子蛋白质，作为化学诱导物可诱导细胞的迁移。CCR7 是一种 G 蛋白偶联受体，在多种淋巴组织中表达。趋化因子通过与CCR 结合从而发挥趋化调节作用。研究表明，肿瘤是由慢性炎症灶发展而来的，在异物和组织损伤的刺激下促进细胞增殖。单纯的细胞增殖并不会引起肿瘤的发生，在大量的炎症细胞、丰富的生长因子及 DNA 损伤因子的作用下，向癌症转变的风险增加。肿瘤的炎症刺激、生长及迁移是一系列高度复杂的过程，需要多种受体参与其调节过程。在正常生理情况下，CCR7 可激活 T、B淋巴细胞，参与 T 淋巴细胞归巢，影响淋巴结和脾脏以及脾脏内 T 淋巴细胞的运输，刺激树突细胞的成熟。在病理情况下，可出现 CCR7 的异常表达，在炎症过程中，趋化因子与其受体结合诱导白细胞向炎症部位移动；在肿瘤发生、发展过程中，CCR7 可促进肿瘤细胞的侵袭及迁移，因而在肿瘤发生、发展过程中扮演重要角色。

CCR7结构：CCR7由3个外显子序列组成，基因定位于17号染色体长臂第 2 区 1 带，如图 1 所示。

CCR7是一个具有七次跨膜结构且与异源三聚体G蛋白偶联的受体蛋白，由 378 个氨基酸组成，主要定位于细胞膜，其蛋白结构如图2所示。位于跨膜域3尾端的蛋白二级结构单元 DRY 模体在受体的激活和 G 蛋白的偶联过程中起着重要作用。DRY 模体的精氨酸与跨膜域 6 形成“离子锁”，与β肾上腺素受体相互作用偶联 G 蛋白。

 

CCR 的功能：

1、 参与炎症反应 早在 1863 年已经有研究者猜测，肿瘤是由慢性炎症灶发展而来的，在异物和组织损伤的刺激下导致炎症的发生，继而促进了细胞的增殖。CCR7 偶联的 G 蛋白有三个亚单位（α、β、γ），趋化因子与受体结合解离 G 蛋白，α、β、γ亚单位组装成二聚体负责钙的转运和激活 Rho GTP 酶及磷脂酰肌醇（-3）激酶（PI3K）信号通路。G 蛋白根据α亚单位特性分为 4 类（αs、αi、αq 及 α12/13），CCR 根据偶联的 G 蛋白不同实现对不同信号通路的激活及不同生物功能的调控。趋化因子 CCL19 与 CCL21 诱导 CCR7 阳性细胞向细胞组织迁移，保持体内 CCR7 阳性细胞的稳态。趋化因子具有高度特异的趋化作用，主要通过招募特异的白细胞来参与炎症反应。

2、参与肿瘤的发生、发展过程 研究者最早在 T 淋巴细胞和自然杀伤性细胞功能缺陷的小鼠中发现，小鼠成瘤后出现局部的炎性浸润灶，暗示肿瘤细胞能释放趋化因子或可能诱导邻近细胞释放趋化因子。现在普遍认为肿瘤组织中趋化因子与受体发生明显的改变，趋化因子能影响肿瘤细胞对白细胞的募集作用进而影响炎症的进展过程。肿瘤细胞能侵袭邻近组织、静脉系统或淋巴系统，并在其中增殖形成新的肿瘤灶。已经有多个实验证实趋化因子及其受体（CCR7）在肿瘤细胞的侵袭过程中起作用。趋化因子及受体还参与血管生成和肿瘤转移。血管生成受到机体严格控制，如伤口愈合时会启动。当肿瘤在机体内增殖时，需要生成血管为肿瘤内部提供血供和营养，肿瘤细胞可沿血流转移至其它组织或器官。如趋化因子 CXC 因修饰位点不同，发挥血管生长因子和血管生成抑制因子作用【1】。

CCR7 与肿瘤

1、CCR7 在乳腺癌中的表达 研究显示，多种乳腺癌细胞中 CCR7 呈阳性表达，免疫组化法分析发现 CCR7在乳腺癌组织中相比癌旁组织表达显著上调，而在三阴性乳腺癌中 CCR7 可作为肿瘤转移的标志物，并且与淋巴结转移及预后密切相关。CCR7 促进干细胞样肿瘤细胞的增殖从而参与了肿瘤的形成，通过抑制乳腺癌细胞的凋亡，降低肿瘤细胞对凋亡相关蛋白的敏感性。除此之外，CCR7 协同或抑制其他蛋白从而发挥在乳腺癌中的作用，如 CCL21 通过激活 CCR7 阳性细胞中的胞内 PI3K 及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路从而促进其迁移[16-17]；在淋巴结阳性转移患者中观察到NF-κB 通路的激活，刺激细胞因子的分泌进而通过CCR7 受体促进肿瘤的转移。而有些MicroRNA 如 let7a 对 CCR7 有抑制作用，let-7a 通过靶向作用于 CCR7抑制其表达进而发挥抑制乳腺癌细胞的迁移与侵袭的功能。由此可见，在组织中 CCR7 的表达对于乳腺癌的生长、转移及预后，指导其临床治疗具有重要的意义。

2、CCR7 在肺癌中的表达 研究显示，肺腺癌细胞系中均检测到 CCR7 的表达，通过实验进一步发现 CCR7通过影响细胞凋亡与细胞周期进而调节肺癌细胞的增殖能力。CCR7 与肺癌的淋巴结转移高度相关，其配体CCL21 能促进腺癌人类肺泡基底上皮细胞（A549）的迁移。CCR7 还通过促进蛋白激酶 1/2（ERK1/2）信号通路，上调特异蛋白-1、基质金属蛋白酶 9（MMP-9）及血管内皮生长因子-D 的表达，增强肺癌细胞的迁移与侵袭能力。由此，提示 CCR7 在肺癌侵袭、转移过程中的重要作用。有报道显示，利用 siRNA 沉默 CCR7，抑制CCR7 上游的蛋白如低氧诱导因子、血管内皮生长因子C 实现对 CCR7 表达的抑制，从而抑制肺癌细胞的增殖与迁移。可见，检测 CCR7 的表达及其定向沉默对指导治疗肺癌具有重要价值。

3、CCR7 在白血病中的表达 研究发现，经全基因组序列分析，成人 T 淋巴细胞白血病（ATL）患者尤其是高度恶性的患者中存在 CCR7 的变异，从而导致 ATL 患者治疗困难、预后差等问题。而通过对比慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者与正常组的单核苷酸多态性，发现6 个与 CLL 高度相关且高风险的基因变异位点。急性淋巴细胞白血病（ALL）患者其 CCR7 表达水平高于急性髓细胞白血病患者。同时，CCR7 的表达水平与非霍奇金淋巴瘤的恶性程度、分期、分级、淋巴结转移相关。在 ALL 患者体内，CCR7 与 Zeta 链辅助蛋白 70 高度相关，能反映 ALL 的中枢转移风险。CCR7 受 IFNα调控，Toll 样受体 2 及 B 淋巴细胞受体能诱导肿瘤细胞向 CCR7 的配体 CCL21 处转移。CCR7 还受各种信号通路的调控，如 PI3K、Rho 鸟苷酸三磷酸化酶及 MAPK，激活 CCR7 从而促进 CLL 的转移和发展。Cuesta-Mateos等开发了针对 CCR7 的单克隆抗体，治疗高危且对氟达拉滨耐药的 CLL 患者，实验发现该抗体能有效特异杀伤 CLL 细胞，临床治疗优于阿伦单抗。

4、CCR7 在胃癌中的表达 在胃癌中，CCR7 影响胃癌细胞的上皮细胞-间充质转化（EMT）进程，促进肿瘤细胞的迁移与侵袭能力，上调转化生长因子β（TGF-β）和锌指转录因子 Snail 的表达，进而调控下游转录因子NF-κB 及细胞外调节蛋白激酶 ERK 等信号通路，促进胃癌细胞的转移能力。MiR-let-7a 及合成过程中参与的基因 Dicer 1 负向调控 CCR7 的表达。同时，研究显示 CCR7 与胃癌预后高度相关，高表达 CCR7 的患者预后不良，此外还有两个报道与其结论一致【1，2, 3】。

5、CCR7 在结直肠癌中的表达 研究显示，高表达CCR7 通过上调 MMP-9 的表达，促进结直肠癌细胞的迁移，且 CCR7 在结直肠癌中与转移、病理分级及预后相关。利用 siRNA 沉默 CCR7 的表达，抑制结直肠癌增殖及侵袭能力，为结直肠癌的治疗提供新的思路。

6、CCR7 在黑色素瘤中的表达 在黑色素瘤中，CCR7与黑色素瘤的预后相关。研究者通过分析临床患者的基因表达谱、有丝分裂指数、定量肿瘤浸润的白细胞及肿瘤转移灶中的 CD3 阳性细胞，了解黑色素瘤的分子表型及其与预后的关系，为临床判断黑色素瘤患者的预后情况提供一定依据。通过免疫疗法，利用树突细胞制作肿瘤相关疫苗，促进特异性的 T 淋巴细胞对黑色素瘤细胞的杀伤作用。另外，利用 CCR7 配体CCL21 的抑制剂（如 Chemotrap-1）与 CCL21 竞争性结合抑制肿瘤的迁移，为治疗黑色素瘤的转移提供一定依据。

7、此外还有关于与CCR7与肝癌的关系研究，有研究表明在肝癌组织中CCR7的表达增加，而且其含量与肝癌的发生、发展、侵袭和转移有相关性【4】。

8、关于CCR7与食管鳞状细胞癌关系研究，CCR7 在 ESCC 细胞中表达增高。通过构建稳定 CCR7 过表达和沉默的 Eca109 细胞系，明确了 CCR7 对 Eca109肿瘤新生血管的促进作用。表明 CCR7 可能对 ESCC 的发生发展和血管生成发挥重要作用，可能作为 ESCC 新的治疗靶点。CCR7 蛋白的过表达能使 NF-kB 报告基因的转录活性增强；CCR7 能够显著提高 IKK 和 IkBα的磷酸化水平；且多种 NF-kB 靶基因（包括 TNF-α、IL-6、IL-8 和TGF-β）在过表达 CCR7 的 Eca109 细胞中表达上调，而在 CCR7 沉默的 Eca109 细胞中表达下调。表明 CCR7 对 NF-kB 信号通路起促进作用。通过体内实验证实注射 CCR7 沉默组 Eca109 细胞裸鼠的肿瘤平均体积比对照组裸鼠明显减少。且移植瘤中 VEGF-A、VEGF-C、TNF-α、IL-6、IL-8 和 TGF-β的蛋白表达水平显著降低，IKK 和 IkBα的磷酸化水平降低，而 IKK 和 IkBα总蛋白水平无显著改变。进一步证实 CCR7 可能通过 NF-kB 信号通路对 ESCC 发挥促进作用【5】。

9、CCR7与宫颈癌

观察组中CXCR4和CCR7的表达阳性率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),CXCR4表达与宫颈癌患者的淋巴结转移密切相关,CXCR4表达与宫颈癌患者的FIGO分期、肿瘤大小、肌层浸润深度、组织病理类型、阴道浸润、子宫旁浸润无关.CCR7的表达与宫颈癌患者的FIGO分期、肿瘤大小、肌层浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.01).结论:宫颈癌中CXCR4和CCR7异常表达,二者在宫颈癌淋巴转移中发挥重要作用【6】。

 

 

动物简介

营养成分

生物学特性

遗传信息

实验仪器

测试流程

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1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

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3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（B6-Ccr7tm1小鼠,动物试验）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。