B6-IL27tm1小鼠,动物试验

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基本信息

品系名称：B6-IL27^tm1小鼠

英文名称：B6-IL27^tm1 mouse

疾病名称：肿瘤、自身免疫疾病、炎症、传染性疾病

相关基因：IL-27

背景品系：C57BL/6J

遗传类型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代数：NA

研究用途：用于研究肿瘤、自身免疫疾病、炎症、传染性疾病等及信号转导方面的研究。

饲养环境：屏障或隔离环境

培育单位：北京华阜康生物科技股份有限公司、中国医学科学院医学实验动物研究所

保种单位：中国医学科学院医学实验动物研究所

资源鉴定：否

鉴定日期：暂无介绍

特征描述

1IL-27组成及其产生

IL-27是 2002年6月美国DNAX 研究所的Pflanz等发现并命名的一种新的IL-6/IL-12家族细胞因子，由 EBI3(与 IL-12p40亚基同源)和 p28(与IL-12p35亚基 同源 )两条多肽链通过二硫键连接构成的异源二聚体。EBI3是一种可溶性细胞因子受体，最初在 EB病毒转化的B细胞培养上清中被发现，后来在体内的研究中发现活化的抗原提呈细胞亦可高效表达EBI3，由于其缺乏膜结合位点故被认为是一种分泌蛋。p28是 Pflanz等在基因库中找到的一种与 IL-6／IL-12家族细胞因子同源的长链四螺旋多肽，人p28基因位于染色体 16pl1上。p28在人和鼠的同源性为73％，它的 cDNA序列分别编码243和 234个氨基酸多肽，蛋白质分子量分别为24.5和 23.6kDa。IL-27与 IL-12的其它两种家族成员 IL-l2和IL-23这三种细胞因子都是包含相关螺旋亚单位(IL-12p35、IL-23p19和 IL-27p28)及可溶性细胞因子受体亚单位 (IL-12p40、IL-23p40和 IL-27EBI3)的异源二聚体 ，因此在结构上具有高度相似性 ，而且均由活化的抗原提呈细胞即单核巨噬细胞和树突状细胞 (dendritic cells，DCs)产生。EBI3的表达与病原体或宿主受到 LPS、CD40配体及炎症性细胞因子刺激有关。与 IL-12p35相似 ，IL-27p28必须和 EBI3结合后才能被有效地分泌到细胞外发挥免疫功能。病理情况下 IL-27的高表达发生于感染 Mycobacteriatuberculosis、Trichurismuris和 Toxoplasmagondii等病原体后发生炎症反应阶段。同样 ，IL-27也高表达于 自身免疫性疾病如人类 Crohn’S病以及小鼠多发性硬化(multiple sclerosis，MS)、实验性脑脊髓膜炎(experiment autoimmune encephalomyelitis，EAE)和慢性 T．gondii感染等中枢神经系统的星形胶质细胞和小胶质细胞。刺激人类单核细胞起源的树突状细胞 (monocyte—derived DCs，MoDCs)和 小鼠骨髓起源的树 突状细胞 bone marrow—derived dendritic cells，BMDCs)以及应用toll样受体激动剂 (toll—like receptor，TLR)刺激单核巨噬细胞能够升高 IL-27的表达[1]。

IL-27促进 1型免疫反应

IL-27在促进 Thl型免疫反应中起重要作用。机体对胞内病原体感染的控制需要建立有效的Thl型免疫反应。从初始 CD4+T细胞向 Thl细胞分化时需要 细胞受体的激活和抗原提呈细胞分泌的Thl型细胞因子的刺激作用。许多体内外实验结果显示，如果小鼠缺乏IL-27R则 Thl型免疫反应减弱，提示IL-27／IL-27R可能直接参与 Thl细胞分化和促进初始 CD4+T细胞的增殖而增强 Thl型免疫反应的发生。最初研究认 为，抗原提呈细胞只有在 IL-12存在的情况下才能够产生 IL-27，并进一步活化初始CD4+T细胞和 NK细胞产生 IFN-γ。IL-12是促进Thl细胞发育的关键性细胞因子，它通过激活STAT4促进初始 CD4+T细胞向 Thl细胞分化。然而静息的初始 CD4+T细胞不表达 IL-l2受体的B2亚单位(IL-12Rβ2)，而 T-bet是在 Thl细胞发育过程中具有中心作用的转录因子，T-bet的一个重要功能就是诱导初始 CD4+T细胞 IL-12Rβ2的表达 ，使其获得对 IL-12的反应性 。故 IL-27协同 IL-12促进初始 CD4+T细胞产生IFN-γ的机制被认为是：IL-27通过 T-bet诱导IL-12Rβ2的表达 ，进而在IL-12的作用下向 Thl细胞分化并分泌 IFN-γ。但后来研究证明，病原体或 LPS也可以 IL-12非依赖的形式刺激抗原提呈细胞分泌 IL-27，进而作用于CD4+T细胞和 NK细胞。其分子基础可能是 IL-27R活化 STAT1，增加转录子 T-bet表达 ，进而作用于靶基因 IL一12Rβ2和 IFN-γ等的转录 。Lucas等研究发现在无 IL-12存在时 ，IL-27还可上调初始CD4+T细胞 ICAM-1的表达，通过ICAM-1／LFA-1(LFA-1由抗原提呈细胞表达)的相互作用促进其向Thl细胞分化 ，说明 IL-27亦可通过与IL-12不同的途径促进Th1分化。IL-27的这种作用通过也是STAT1介导而不依赖STAT4，STAT3可能在IL-27诱导初始 CD4+T细胞增殖反应中发挥重要作用 ，因此，IL-27通过不同的信号转导途径发挥不同生物学活性。

IL-27对 Thl型免疫的负调控作用

IL-27不仅能够促进初始CD4+T细胞的增殖和向Thl细胞分化而增强 Thl型免疫反应的发生，也可对Thl反应发挥反馈调控作用，能够限制 Thl型免疫反应的强度和持续时间，以防止机体过度免疫反应引起的病理性损伤 。因此，IL-27对Thl型免疫反应具有双重调节作用。

感染T.gondii的IL-27R-/-小鼠虽然能建立有效的Thl型免疫反应，但是在感染后期不能下调这种保护性反应，IL-27 R-/-小 鼠 Thl细 胞 较 正 常 Thl细胞具有更强的增值反应，最终发展成以过量IFN-γ产生及 T细胞过增殖为特征的致死性炎症反应，提示 IL-27可通过抑制Thl细胞增殖而控制Thl型免疫的强度。同样 ，与野生型小鼠相比，感染Trypanosma cruzi（T.cruzi)的 IL-27R 小鼠发生Thl介导的严重肝脏损伤，。Holscher究表明虽然在感染 Mycobacterium tubercuzosis后病原体清除依赖于 Thl型细胞免疫反应中 CD4+T细胞和IFN-γ 的产生，在 IL-27R-／-小 鼠感染结核晚期却产生大量IFN-γ 等促炎细胞因子，引起广泛的炎症反应而加速了死亡。Yamanakaiz采用注射ConA诱导肝炎的非病原体感染的小鼠动物模型研究表明缺乏IL-27后NKT细胞能够产生大量的IFN-γ 使其易感性增加。这些研究提示IL-27对过度Thl型免疫反应具有抑制作用。IL-27R-／-小 鼠是公认的促进Thl增殖和维持其生存的细胞因子，在体外分化实验中，IL-27R小鼠的CD4+T细胞产生的IL-2比野生型的多而加人rlL-27能抑制 IL-2mRNA和蛋白的表达，说明IL-27有抑制 IL-2产生的作用。此外，IL-27可以协同 IL-12抑制 IL-2的分泌，因而IL-27和 IL-12都具有抑制 IL-2的作用，而相关的细胞因子IL-6和IL-23没有这种特性。IL-27抑制 IL-2产的作用依赖 STAT1途径，而不是STAT3、STAT4和 T-bet，这种抑制作用与抑制性细胞因子信号 (suppressor of cytokine signaling，SOCS)3 的表达高度相关，而SOCS3是一种炎症反应的抑制性蛋白。IL-27诱生的 SOCS3的表达在Thl效应的负反馈调节机制中起着关键性的作用。 因此，IL-27能够通过上调SOCS3的表达抑制lL-2的分泌和IL-2介导的Thl型细胞增殖。

IL-27可作为 Th2型反应的抑制剂

IL-27不仅可对Thl反应起负调控作用，对 Th2反应也可发挥抑制作用 。体外实验利用分选的小鼠cD4+T 细胞研究发现 ，尽管IL-4能够促进 IL-13的分泌 ，但给予IL-27后 IL-13的分泌量明显降低。Th2分化过程 中，IL-27R 的 CD4+T细胞比野生型CD4+T产生更多的 IL-5和 IL-13，说明 IL-27直接抑制 CD4+T细胞产生IL-4。在体内试验中，L．major感染早期产生以 IL-4高表达为特征性的免疫反应，利用IL-27R-／-小鼠建立动物模型研究发现，小鼠表现出的早期易感性与 Th2反应的加强和Thl细胞产生减少有关，这与普遍认同的 IL-27提高Thl活性的观点一致 ，但在感染晚期因为缺乏 IL-27R形成了 L．major特异性 Thl细胞并控制了感染。在此过程中IL-27的主要作用是限制了早期 Th2活性而不是影响Thl型免疫反应。预先给与 WSX-1-／- 鼠IL-4特异性抗体能够逆转此早期易感性，说明缺乏IL-27则可使Th2活性增强。同样，在哮喘和肾小球肾炎动物模型中，缺乏 IL-27R的小鼠炎症反应加剧与Th2反应增强有关。IL-27通过抑制转录子GATA-3的表达直接抑制 Th2反应的效应与加强IFN-γ产生的能力无关。GATA-3是 IL-4诱导产生的促进 Th2细胞发育的一种关键的转因子 ，它能引起多种Th2型细胞 因子(如 IL一4，IL-13)的转录 ，还可以通过抑制IL-12Rβ2和 STAT4的表达而阻断 Thl细胞的分化 ，IL-27正是通过GATA-3途径 抑制 Th2型反应。

IL-27可抑制 Thl7细胞的分化

Thl7细胞作为T辅助细胞家族的一个独立谱系已经从传统的 Thl和Th2细胞中分离 出来。最近有研究者用 WSX-1-／- 小鼠对自身免疫性脑脊髓炎的研究结果表明，缺乏IL-27信号导致的炎症反应加重与炎症组织中表达IL-17的T细胞数量增多有关。尽管 IFN-γ 受体参与了抑制 Thl7细胞分化，IL-27对 IFN-γ小鼠的T细胞或抗原提呈细胞的分化仍起到抑制作用，说明陔抑制作用不依赖于INF-γ受体的存在。STAT1信号系统是IL-27和IFN-γ在细胞内的共同途径，在 STAT1 ko 小 鼠IL-27不能抑制 IL-17的产生，而对自身免疫性脑脊髓炎易感性增加，说明 IL-27可通过STATI途径起作用 ，但 STAT1途径的下游基因和具体调节通路仍需深入研究。还有研究表明，IL-27还可通过下调 IL-6和 TGF-β的表达对Thl7细胞的分化起抑制作用。而 T-bet和抑制蛋白 SOCS3在 IL-27抑制 Th17细胞分化中不起作用。IL-27也可以通过下调 IL-6抑制 CD4+T细胞增殖，这说明IL-27抑制Thl7细胞分化 的作用与前面讨论的 IL-27对病原体感染免疫反应的负调控作用相一致。

IL-27对调节性 T细胞的作用

IL-27不仅Th细胞有重要的调节作用，还能够通过 TGF-β的作用抑制诱导型调节性 T细胞(inducible regulatory T cells，iTregs)的分化与增殖 ，这一点与上述IL-27的抗炎作用相一致。然而，IL-27抑制诱导型调节性T细胞产生的体内实验研究还未见报道，IL-27受体亚单也高水平表达于调节性 T细胞 的另外一个亚群CD4+CD25+天然型调节性T细胞(natural regulatory T cells)，但至今尚未证实IL-27对其发挥促进作用还是抑制作用。

IL-27在炎症性疾病中的作用

IL-27通过抑制特异性Th亚群细胞子的产生抑制炎症反应的强度并发挥抗炎活性。动物实验结果表明，WSX-1-／- 小鼠对Listeriamonocytogen。es和L.major的易感性增加，伴有 IL-6、TNF-γ 和 TNF-γ等炎症细胞因子产生的增加 ，表明 IL-27在抵御 细胞内病原体感染的Thl型免疫中可能发挥一定的作用。而在小鼠 gondii和 cruzi及结核菌感染过程中，IL-27主要表现为限制 Thl型免疫反应的强度， WSX-1-／- 小鼠表现为产生过量IFN-γ 而形成了严重的肝脏坏死，这说明在不同病原体感染时细胞 因子的产生和相互作用情况不同。

IL-27对自身免疫性疾病的治疗也有重要作用。前已述及，IL-27被认为参与自身免疫性疾病的发生并且可以控制免疫反应的强度和持续时间。在由Thl反应介导的实验性自身免疫性脑脊髓膜炎和自身免疫性关节炎动物模型中，给与外源性的抗IL-27p28的抗体可有效缓解疾病的进程。另外在Thl相关性肉芽肿性疾病 (结核 、肉样瘤病和克隆病)中表达量增， WSX-1-／- 小鼠在感染结核晚期可产生大量促炎细胞因子引起广泛的炎症反应而加速死亡，而给予 IL-27能够有效抑制炎症的进展， WSX-1-／- 小鼠膜型肾小球肾炎的发生率显著降低。上述这些资料提示，IL-27参与这些疾病的发病过程 ，阻断其作用可以起到治疗作用【1】。IL-27可以调节T细胞的增殖分化,发挥促进炎症反应和抗炎症反应的双重作用。在多个自身免疫性疾病模型中发现,IL-27能够通过抑制Th17细胞的分化来抑制炎症发展。现不断有研究发现Th17细胞参与了系统性红斑狼疮(sys-temic lupus erythematosus,SLE)的发病,因此,IL-27在SLE的发病中也可能发挥一定作用。另外注射IL-27单抗或者放大IL-27的信号能够抑制自身免疫性糖尿病和狼疮小鼠的疾病发展,提示IL-27可能与SLE的治疗相关【2】。原发性干燥综合征患者外周血单个核细胞中IL-27/P28及IL-27/EBl3mRNA相对表达量及其血浆IL-27浓度均显著低于健康对照组;原发性干燥综合征患者血浆IL-27浓度与抗SSA抗体,抗SSB抗体及IgE水平存在一定相关性.结论IL-27在原发性干燥综合征患者外周血中表达降低,且与原发性干燥综合征的发生发展存在一定的相关性,其可能参与了原发性干燥综合征的发病过程【3】。

IL-27在抗肿瘤免疫反应中的作用

由于IL-27在Thl型免疫反应中的作用，推测IL-27在抗肿瘤免疫中也发挥重要作用。Hisada和Shinozaki分别将转染 IL-27基因的小鼠结肠癌细胞 C26、神经母细胞瘤 TBJ移植小鼠体内，发现肿瘤的生长均受到明显抑制 ，IL-27能够促进小鼠 CD4+T细胞的活化和特异性CTL活性增强等Thl型免疫反应 ，产生 IFN-γ 介导的抗原特异性抗肿瘤免疫，并通过活化记忆性 T细胞发挥免疫记忆的效应对同种移植瘤的再次接种产生免疫识别而清除。Motom等对低免疫原性的小鼠黑色素瘤细胞 B16F10的研究发 现，IL-27不仅通过活化免疫系统发挥抗肿瘤作用还有直接的抗血管生成作用，能够 以 IFN-γ依赖和非依赖的形式作用于内皮细胞产生抗肿瘤趋化因子 IP-l0和 MIG而抑制新生血管生成，这个作用是通过 STAT1途径完成的。Liu等将人食管癌细胞Ecal09细胞移植裸鼠体内研究表明，IL-27能够活化NK细胞，通过产生IFN-γ、TNF-a等炎症性细胞因子和促进肿瘤细胞凋亡的作用发挥抗肿瘤活性。在此过程中，炎症性细胞因子高表达只在肿瘤移植的早期观察到，这与 IL-27在炎症反应中的两面性相一致。但还没有关于内源性 IL-27在肿瘤监视和控制中作用的研究报道。在用人外周血CD4+T细胞和单核细胞起源的巨噬细胞对 HIV感染的研究中，DNA微点阵分析结果显示 IL-27可以诱导单核细胞起源的巨噬细胞产生各种干扰素诱导基因(IFIG)从而产生抗 HIV作用，其作用机制与IFN-a作用相似，IL-27能够抑制HIV病毒复制但不能促进干扰素分泌【1】。胃癌患者血清IL-27表达升高,可能与胃癌发生和进展有关。2.联合PGR和HP检测,血清IL-27对胃癌临床早期筛查有一定的提示作用【5】。

动物简介

营养成分

生物学特性

遗传信息

实验仪器

测试流程

注意事项

1.具体的试验周期以工程师告知的为准。

2.文章中的图片或者标准以及具体的试验方案仅供参考，因为每个样品和项目都有所不同，所以最终以工程师告知的为准。

3.关于（样品量）的需求，最好是先咨询我们的工程师确定，避免不必要的样品损失。

4.加急试验周期一般是五个工作日左右，部分样品有所差异

5.如果对于（B6-IL27tm1小鼠,动物试验）还有什么疑问，可以咨询我们的工程师为您一一解答。